Публикации
«Современный урок в условиях реализации ФГОС»
Всероссийский сборник статей и публикаций института развития образования, повышения квалификации и переподготовки.
Скачать публикацию
Язык издания: русский
Периодичность: ежедневно
Вид издания: сборник
Версия издания: электронное сетевое
Публикация: «Современный урок в условиях реализации ФГОС»
Автор: Зимина Татьяна Петровна
Периодичность: ежедневно
Вид издания: сборник
Версия издания: электронное сетевое
Публикация: «Современный урок в условиях реализации ФГОС»
Автор: Зимина Татьяна Петровна
ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ПРОФЕССИОНАЛЬНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ
НИЖЕГОРОДСКОЙ ОБЛАСТИ
НИЖЕГОРОДСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ
Методические указания для студентов.
МДК 04.01: Теория и практика лабораторных микробиологических исследований
Для специальности 31.02.03 Лабораторная диагностика.
Тема: Микробиологические исследования молока
и молочных продуктов.
Разработала
преподаватель Зимина Т.П.
Нижний Новгород
2017 год
Содержание учебного материала
Молоко и молочные продукты являются благоприятной средой для размножения микроорганизмов.
При изготовлении некоторых молочных продуктов: творога, кефира, простокваши, ряженки и других используют специальную микрофлору, например молочнокислые стрептококки, молочно-кислые ацидофильные палочки и др. Микрофлора, используемая для приготовления этих продуктов, является для них специфичной и не учитывается.
Неспецифической микрофлорой, встречающейся в молоке и молочных продуктах, являются аэробные бактерии: БГКП, стафилококки и др.
С молоком могут передаваться возбудители туберкулеза, бруцеллеза, сальмонеллеза, сибирской язвы, вирус полиомиелита, анаэробные бациллы и т. д.
Обсеменение молока и молочных изделий неспецифической микрофлорой может произойти в момент удоя, транспортировки, хранения и т. д.
Исследование молока и молочных продуктов проводят согласно ГОСТу 9225—84.
Отбор проб. Пробы жидких и полужидких продуктов после тщательного их перемешивания отбирают в количестве 50—100 мл в стерильные колбы. Пробы сливочного масла, сыра, творога отбирают с помощью стерильного щупа из глубины продукта. Перед взятием пробы масла, творога верхний слой продукта тщательно зачищают, а поверхность сыра в месте отбора пробы прижигают раскаленным ножом. Из расфасованных продуктов берут по 2 образца в оригинальной упаковке.
Правила заполнения сопроводительного документа.
Взятые образцы сопровождают документом, в котором указывают:
1. Номер образца.
2. Наименование и сорт продукта.
3. Дату изготовления.
4. Дату и час отбора пробы.
5. Объем необходимых исследований,
6. Должность и подпись лица, отобравшего пробу.
Условия хранения и транспортировку отобранных проб.
Микробиологическое исследование продукта должно производиться не позднее чем через 4 ч с момента отбора пробы. При транспортировке температура не должна превышать 6 С.
ГОСТ для молока и молочных изделий предусматривает определение общего числа бактерий в I г (мл) и определение коли - титра цитратотрицательных (цитратнегативных) разновидностей БГКП.
Определение ОМЧ молока.
Подготовка образцов для исследования.
Из молока и молочных продуктов готовят десятикратные разведения (по общепринятой методике). Количество разведений для каждого вида продукта готовят с учетом наиболее вероятного микробного обсеменения (табл. 1).
Посев. По 1 мл каждого разведения вносят в 2 — 3 стерильные чашки Петри и заливают 12 — 15 мл охлажденного до 45 градусов питательного агара. Предварительно чашки маркируют. Сразу после заливки содержимое чашки перемешивают (путем легкого вращательного покачивания) для равномерного распределения посеянного материала. Посевы ставят в термостат при 37 С на 48 ч.
Таблица 1. Разведение молока и молочных продуктов
Наименование продукта
Засеваемые разведения
Молоко и сливки сырые
Молоко и сливки пастеризованные
Молоко сгущенное с сахаром, какао, кофе
Масло сладкосливочное
Мороженое
1:10000
1:10
1:10
1:100
1:10
1:100000
1:100
1:100
1:1000
1:100
1:1 000000
1:1000
1:1000
1:10000
1:1000
Для определения общего количества бактерий следует выбирать те разведения, при посевах которых на чашках вырастает не менее 50 и не более
300 колоний.
По истечении срока инкубации чашки вынимают и подсчитывают число колоний при помощи счетчика. Число колоний, выросших на каждой чашке, умножают на соответствующее разведение. Полученные результаты по отдельным чашкам складывают, делят на количество чашек и получают среднее арифметическое, которое является показателем общего числа бактерий в 1 г (мл). Результат исследования студенты заносят в дневник.
Соответствующие ГОСТы регламентируют качество продуктов, что устанавливают по допустимым показателям: общему числу микробов и коли-титру. Пример для двух видов продуктов представлен в табл.2.
В кисломолочных продуктах (кефир, простокваша, творог, сметана и др.), содержащих обильную специфическую микрофлору, общее количество бактерий не определяют, а контролируют состав микрофлоры. Для этого из кисломолочных продуктов готовят препараты и красят метиленовым синим. В поле зрения препарата должны находиться только специфические для данного продукта микроорганизмы. Например, для простокваши— молочно-кислые стрептококки и палочки; для кефира—молочно-кислые стрептококки и палочки, единичные дрожжи. Микроскопия позволяет выявить микроорганизмы порчи (плесени и большое количество дрожжей)
Таблица 2.Показатели общего числа бактерий и коли – титра в молоке.
Наименование
продукта
ГОСТы
Допустимое число бактерий в 1 мл
Коли –титр
не ниже
(г)
Пастеризованное
молоко:
группа А
группа Б
Пастеризованные
Сливки:
группа А
группа Б
ГОСТ 13277 — 67
ГОСТ 4964— 75
75000
150000
100000
200000
3
0.3
3
0,3
Для других молочных продуктов также имеется ГОСТ, обуславливающий допустимое количество микробов в 1 мл (г) продукта. Буквы А и Б обозначают категорию продукта.
Определение БГКП
Обсемененность молока и молочных продуктов бактериями группы кишечной палочки определяют бродильным методом. Бродильный титр — это то наименьшее количество продуктов, выраженное в граммах или миллилитрах, в котором присутствует кишечная палочка. Согласно ГОСТу 9225—68 учитываются только цитратнегативные разновидности кишечной палочки.
Бродильный метод
Первый день исследования
Посев молока и молочно-кислых продуктов производят в 6 пробирок с 5 мл среды Кесслср. В 3 пробирки засевают по 1 мл цельного продукта, в другие 3 пробирки по I мл из разведения 1:10 (0,1 мл). Посевы инкубируют в термостате при 43 С 18—24 ч.
Второй день исследования
Из каждой забродившей пробирки производят посев на сектор среды Эндо и инкубируют при 37 "С 18—24 ч.
Третий день исследования
При отсутствии типичных для БГКП колоний продукт считают незагрязненным кишечной палочкой.
При наличии типичных для БГКП колоний делают мазки, окрашивают по Граму, определяют морфологию .При обнаружении грамотрицательных палочек ставят пробу на оксидазу, производят посев на среду Гиса с глюкозой и среду Козера.
Четвертый день исследования
Производят учет результатов. Наличие кислоты и газа на среде с глюкозой и отсутствие роста на среде Козера свидетельствует о наличии цитратнегативных разновидностей кишечной палочки. Коли-титр вычисляют по таблице 3.
Таблица 3.Вычесление коли – титра в пастеризованном молоке, сливках, кефире, простокваше, ацидофильном молоке.
Варианты
Кишечная палочка обнаружена в следующих, Коли - титр
объемах, мл
а
1
1
1
0,1
0,1
0,1
>3
-
-
-
-
-
-
б
+
-
-
-
-
-
3
в
+
+
+
+
+
-
<3
г
+
+
-
+
+
+
<3
д
+
+
+
+
-
+
<3
Вычисление коли – титра для масла, сыра, творожных изделий, мороженного и молочных консерв проводят по другим таблицам, указанным в ГОСТе.
Присутствие патогенных микроорганизмов в молоке и молочных продуктах недопустимо.
Питательные среды
Среда Кесслср. К 1 л дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 50 мл желчи. Смесь кипятят, охлаждают, прибавляют 10 г лактозы, устанавливают рН 7,4 – 7,6, добавляют 4 мл 1% водного раствора генцианового фмолетового. Среда стерилизуется 15 мин при давлении 0,5 атм.(112 С). Среда имеет фиолетовый цвет.
Среда Козера. К 1 л дистиллированной воды добавляют 1,0 г фосфата однезамещенного калия, 0,2 г сульфата магния, 2,5—3,0 г цитрата натрия. Раствор стерилизуют в автоклаве при 1 атм в течение 15 мин, добавляют 10 мл 0,5% спиртового раствора бром-тимолового синего и разливают в стерильные пробирки.
Среда глюкозой. К 1 л дистиллированной воды добавляют 2г среды с индикатором ВР и глюкозой. Среда стерилизуется 15 мин при давлении 0,5 атм.(112 С).
Среда Эндо. К 1 л дистиллированной воды добавляют среды Эндо согласно рецепта указанного на этикетке. Среда стерилизуется 15 мин при давлении 0,5 атм.(112 С).
Желточно - солевая среда. К 1 л дистиллированной воды добавляют питательного агара согласно рецепта указанного на этикетке, 7 г поваренной соли. Среда стерилизуется 15 мин при давлении 0,5 атм.(112 С). Среда готовится и разливается в боксе. К расплавленному и охлажденному до 45 С солевому питательному агару добавляют 15 мл желточной взвеси (1 желток + 150 мл 0,8 % физиологического раствора).
1.Оцените ферментативные свойства микроорганизмов.
2. Определите культуральные свойства микроорганизмов на среде Эндо.
1.Назовите методы окраски возбудителя сибирской язвы.
2. Определите культуральные свойства.
1.Определите и охарактеризуйте серологический тип шигелл.
2. Назовите культуральные свойства шигелл.
1.Опишите культуральные свойства стафилококка.
2.Назовите факторы патогенности стафилококка.
Определите серологический тип сальмонелл.
1.Определите коли – титр молока
НИЖЕГОРОДСКОЙ ОБЛАСТИ
НИЖЕГОРОДСКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ
Методические указания для студентов.
МДК 04.01: Теория и практика лабораторных микробиологических исследований
Для специальности 31.02.03 Лабораторная диагностика.
Тема: Микробиологические исследования молока
и молочных продуктов.
Разработала
преподаватель Зимина Т.П.
Нижний Новгород
2017 год
Содержание учебного материала
Молоко и молочные продукты являются благоприятной средой для размножения микроорганизмов.
При изготовлении некоторых молочных продуктов: творога, кефира, простокваши, ряженки и других используют специальную микрофлору, например молочнокислые стрептококки, молочно-кислые ацидофильные палочки и др. Микрофлора, используемая для приготовления этих продуктов, является для них специфичной и не учитывается.
Неспецифической микрофлорой, встречающейся в молоке и молочных продуктах, являются аэробные бактерии: БГКП, стафилококки и др.
С молоком могут передаваться возбудители туберкулеза, бруцеллеза, сальмонеллеза, сибирской язвы, вирус полиомиелита, анаэробные бациллы и т. д.
Обсеменение молока и молочных изделий неспецифической микрофлорой может произойти в момент удоя, транспортировки, хранения и т. д.
Исследование молока и молочных продуктов проводят согласно ГОСТу 9225—84.
Отбор проб. Пробы жидких и полужидких продуктов после тщательного их перемешивания отбирают в количестве 50—100 мл в стерильные колбы. Пробы сливочного масла, сыра, творога отбирают с помощью стерильного щупа из глубины продукта. Перед взятием пробы масла, творога верхний слой продукта тщательно зачищают, а поверхность сыра в месте отбора пробы прижигают раскаленным ножом. Из расфасованных продуктов берут по 2 образца в оригинальной упаковке.
Правила заполнения сопроводительного документа.
Взятые образцы сопровождают документом, в котором указывают:
1. Номер образца.
2. Наименование и сорт продукта.
3. Дату изготовления.
4. Дату и час отбора пробы.
5. Объем необходимых исследований,
6. Должность и подпись лица, отобравшего пробу.
Условия хранения и транспортировку отобранных проб.
Микробиологическое исследование продукта должно производиться не позднее чем через 4 ч с момента отбора пробы. При транспортировке температура не должна превышать 6 С.
ГОСТ для молока и молочных изделий предусматривает определение общего числа бактерий в I г (мл) и определение коли - титра цитратотрицательных (цитратнегативных) разновидностей БГКП.
Определение ОМЧ молока.
Подготовка образцов для исследования.
Из молока и молочных продуктов готовят десятикратные разведения (по общепринятой методике). Количество разведений для каждого вида продукта готовят с учетом наиболее вероятного микробного обсеменения (табл. 1).
Посев. По 1 мл каждого разведения вносят в 2 — 3 стерильные чашки Петри и заливают 12 — 15 мл охлажденного до 45 градусов питательного агара. Предварительно чашки маркируют. Сразу после заливки содержимое чашки перемешивают (путем легкого вращательного покачивания) для равномерного распределения посеянного материала. Посевы ставят в термостат при 37 С на 48 ч.
Таблица 1. Разведение молока и молочных продуктов
Наименование продукта
Засеваемые разведения
Молоко и сливки сырые
Молоко и сливки пастеризованные
Молоко сгущенное с сахаром, какао, кофе
Масло сладкосливочное
Мороженое
1:10000
1:10
1:10
1:100
1:10
1:100000
1:100
1:100
1:1000
1:100
1:1 000000
1:1000
1:1000
1:10000
1:1000
Для определения общего количества бактерий следует выбирать те разведения, при посевах которых на чашках вырастает не менее 50 и не более
300 колоний.
По истечении срока инкубации чашки вынимают и подсчитывают число колоний при помощи счетчика. Число колоний, выросших на каждой чашке, умножают на соответствующее разведение. Полученные результаты по отдельным чашкам складывают, делят на количество чашек и получают среднее арифметическое, которое является показателем общего числа бактерий в 1 г (мл). Результат исследования студенты заносят в дневник.
Соответствующие ГОСТы регламентируют качество продуктов, что устанавливают по допустимым показателям: общему числу микробов и коли-титру. Пример для двух видов продуктов представлен в табл.2.
В кисломолочных продуктах (кефир, простокваша, творог, сметана и др.), содержащих обильную специфическую микрофлору, общее количество бактерий не определяют, а контролируют состав микрофлоры. Для этого из кисломолочных продуктов готовят препараты и красят метиленовым синим. В поле зрения препарата должны находиться только специфические для данного продукта микроорганизмы. Например, для простокваши— молочно-кислые стрептококки и палочки; для кефира—молочно-кислые стрептококки и палочки, единичные дрожжи. Микроскопия позволяет выявить микроорганизмы порчи (плесени и большое количество дрожжей)
Таблица 2.Показатели общего числа бактерий и коли – титра в молоке.
Наименование
продукта
ГОСТы
Допустимое число бактерий в 1 мл
Коли –титр
не ниже
(г)
Пастеризованное
молоко:
группа А
группа Б
Пастеризованные
Сливки:
группа А
группа Б
ГОСТ 13277 — 67
ГОСТ 4964— 75
75000
150000
100000
200000
3
0.3
3
0,3
Для других молочных продуктов также имеется ГОСТ, обуславливающий допустимое количество микробов в 1 мл (г) продукта. Буквы А и Б обозначают категорию продукта.
Определение БГКП
Обсемененность молока и молочных продуктов бактериями группы кишечной палочки определяют бродильным методом. Бродильный титр — это то наименьшее количество продуктов, выраженное в граммах или миллилитрах, в котором присутствует кишечная палочка. Согласно ГОСТу 9225—68 учитываются только цитратнегативные разновидности кишечной палочки.
Бродильный метод
Первый день исследования
Посев молока и молочно-кислых продуктов производят в 6 пробирок с 5 мл среды Кесслср. В 3 пробирки засевают по 1 мл цельного продукта, в другие 3 пробирки по I мл из разведения 1:10 (0,1 мл). Посевы инкубируют в термостате при 43 С 18—24 ч.
Второй день исследования
Из каждой забродившей пробирки производят посев на сектор среды Эндо и инкубируют при 37 "С 18—24 ч.
Третий день исследования
При отсутствии типичных для БГКП колоний продукт считают незагрязненным кишечной палочкой.
При наличии типичных для БГКП колоний делают мазки, окрашивают по Граму, определяют морфологию .При обнаружении грамотрицательных палочек ставят пробу на оксидазу, производят посев на среду Гиса с глюкозой и среду Козера.
Четвертый день исследования
Производят учет результатов. Наличие кислоты и газа на среде с глюкозой и отсутствие роста на среде Козера свидетельствует о наличии цитратнегативных разновидностей кишечной палочки. Коли-титр вычисляют по таблице 3.
Таблица 3.Вычесление коли – титра в пастеризованном молоке, сливках, кефире, простокваше, ацидофильном молоке.
Варианты
Кишечная палочка обнаружена в следующих, Коли - титр
объемах, мл
а
1
1
1
0,1
0,1
0,1
>3
-
-
-
-
-
-
б
+
-
-
-
-
-
3
в
+
+
+
+
+
-
<3
г
+
+
-
+
+
+
<3
д
+
+
+
+
-
+
<3
Вычисление коли – титра для масла, сыра, творожных изделий, мороженного и молочных консерв проводят по другим таблицам, указанным в ГОСТе.
Присутствие патогенных микроорганизмов в молоке и молочных продуктах недопустимо.
Питательные среды
Среда Кесслср. К 1 л дистиллированной воды добавляют 10 г пептона, 50 мл желчи. Смесь кипятят, охлаждают, прибавляют 10 г лактозы, устанавливают рН 7,4 – 7,6, добавляют 4 мл 1% водного раствора генцианового фмолетового. Среда стерилизуется 15 мин при давлении 0,5 атм.(112 С). Среда имеет фиолетовый цвет.
Среда Козера. К 1 л дистиллированной воды добавляют 1,0 г фосфата однезамещенного калия, 0,2 г сульфата магния, 2,5—3,0 г цитрата натрия. Раствор стерилизуют в автоклаве при 1 атм в течение 15 мин, добавляют 10 мл 0,5% спиртового раствора бром-тимолового синего и разливают в стерильные пробирки.
Среда глюкозой. К 1 л дистиллированной воды добавляют 2г среды с индикатором ВР и глюкозой. Среда стерилизуется 15 мин при давлении 0,5 атм.(112 С).
Среда Эндо. К 1 л дистиллированной воды добавляют среды Эндо согласно рецепта указанного на этикетке. Среда стерилизуется 15 мин при давлении 0,5 атм.(112 С).
Желточно - солевая среда. К 1 л дистиллированной воды добавляют питательного агара согласно рецепта указанного на этикетке, 7 г поваренной соли. Среда стерилизуется 15 мин при давлении 0,5 атм.(112 С). Среда готовится и разливается в боксе. К расплавленному и охлажденному до 45 С солевому питательному агару добавляют 15 мл желточной взвеси (1 желток + 150 мл 0,8 % физиологического раствора).
1.Оцените ферментативные свойства микроорганизмов.
2. Определите культуральные свойства микроорганизмов на среде Эндо.
1.Назовите методы окраски возбудителя сибирской язвы.
2. Определите культуральные свойства.
1.Определите и охарактеризуйте серологический тип шигелл.
2. Назовите культуральные свойства шигелл.
1.Опишите культуральные свойства стафилококка.
2.Назовите факторы патогенности стафилококка.
Определите серологический тип сальмонелл.
1.Определите коли – титр молока
