Публикации "Методические указания для студентов к лабораторным работам по учебной дисциплине "Основы микробиологии и иммунологии""

Всероссийский сборник статей и публикаций института развития образования, повышения квалификации и переподготовки.

Скачать публикацию

Язык издания: русский
Периодичность: ежедневно
Вид издания: сборник
Версия издания: электронное сетевое
Публикация: "Методические указания для студентов к лабораторным работам по учебной дисциплине "Основы микробиологии и иммунологии""
Автор: Куфтерин Сергей Михайлович

Государственное бюджетное образовательное учреждениесреднего профессионального образования«Ейский медицинский колледж»министерства здравоохранения Краснодарского краяМЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ ДЛЯ СТУДЕНТОВК ЛАБОРАТОРНЫМ РАБОТАМ ПО УЧЕБНОЙ ДИСЦИПЛИНЕ «Основы микробиологии и иммунологии» Составитель2023МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯДЛЯ СТУДЕНТОВ К ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЕ № 1Тема «Работа с микроскопом. Иммерсионная микроскопия»Цель: освоить иммерсионную микроскопию готовых препаратовСтудент должен знать:

устройство микроскопа

технику микроскопирования готовых препаратов

Студент должен уметь:

микроскопировать готовые препараты

Общие и профессиональные компетенции, которые актуализируются во время проведении лабораторной работы при изучении учебной дисциплины Основы микробиологии и иммунологии:ОК 1. Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес.ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их выполнение и качество.ОК 6. Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством потребителями.ОК 7. Брать на себя ответственность за работу членов команды (подчиненных), за результат выполнения заданий.ОК 12. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.ПК 1.5. Проводить первичный туалет новорожденного, оценивать и контролировать динамику его состояния, осуществлять уход и обучать родителей уходу за новорожденным. ПК 2.3. Оказывать доврачебную помощь при острых заболеваниях, несчастных случаях, чрезвычайных ситуациях и в условиях эпидемии. ПК 3.1. Проводить профилактические осмотры и диспансеризацию женщин в различные периоды жизни. ПК 3.3. Выполнять диагностические манипуляции самостоятельно в пределах своих полномочий. ПК 3.6. Проводить санитарно-просветительскую работу по вопросам планирования семьи, сохранения и укрепления репродуктивного здоровья.ПК 4.2. Оказывать профилактическую и медико-социальную помощь беременной, роженице, родильнице при акушерской и экстрагенитальной патологии. Оснащение лабораторной работы: 1. Приборы для микроскопии - микроскопы.2. Иммерсионное масло.3. Готовые микроскопические препараты.План самостоятельной лабораторной работы:

Получить микроскопы и препараты для микроскопирования; зафиксировать в тетради тему, цель, требования к знаниям и умениям, оснащение лабораторной работы. Ознакомиться с правилами работы в микробиологической лаборатории.

Ознакомиться с устройством микроскопа и составить краткий конспект в тетради для лабораторных работ.

Освоить технику микроскопирования при малом и большом увеличении, при иммерсионном увеличении.

Промикроскопировать готовые микробиологические препараты. Зарисовать в тетради для лабораторных работ просмотренные препараты, сделать вывод (описать увиденные бактерии – определить их морфологию).

Закончить микроскопирование; студент должен привести в порядок свое рабочее место; сдать микроскоп и готовые микроскопические препараты лаборанту; представить преподавателю для подписи тетрадь для лабораторных работ.

I ЭТАП ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫПравила работы в микробиологической лаборатории

В помещении лаборатории необходимо строго соблюдать чистоту и порядок. На рабочем столе не должно быть никаких посторонних предметов. Запрещается прием пищи, излишние разговоры, суета.

Запрещается выносить за пределы лаборатории, какие бы то ни было посуду и материалы, которые используются для проведения лабораторных работ (микроскопы, пробирки, краски и т. д.).

Во время выполнения практических работ нельзя открывать форточки. Необходимо соблюдать тишину, избегать лишнего движения и хождения, открывания и закрывания дверей – всего того, что усиливает движение воздуха.

Микроскоп, готовые микроскопические препараты для работы принимает дежурный по подгруппе у лаборанта и раздает студентам в присутствии преподавателя.

На занятиях студенты должны иметь тетрадь для лабораторных работ и карандаши (простой и цветные – красный и синий). Рисунки при микрокопировании надо делать с препаратов, а не из книг или пособий.

В начале занятия необходимо записать в тетрадь для лабораторных работ дату, номер лабораторной работы, тему работы, требования к знаниям и умениям, оснащение лабораторной работы, краткий план выполняемой работы. В процессе работы делаются записи и зарисовки в тетрадь лабораторных работ.

II ЭТАП ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫУстройство микроскопаМикроскоп (рис.1) - оптический прибор для изучения микрообъектов. Студенческие лаборатории чаще оснащены микроскопами МБИ-1. В научных и практических микробиологических лабораториях используют микроскопы отечественных марок: МБР – 1, МБИ-1, МБИ-2, МБИ-3, Биолам Р-1 и другие. Они предназначены для изучения формы, структуры, размеров и других признаков микроорганизмов, величина которых не менее 0.2-0.3 мкм. Поскольку микробы очень малы, то измеряются они в микрометрах (мкм - тысячная доля миллиметра) и потому изучение их возможно только с помощью микроскопов, дающих достаточно большое увеличение. Общее увеличение микроскопа слагается из произведения увеличений объектива и окуляра. Обычно при микробиологических исследованиях для получения полезного увеличения в 600-1000 раз используют объективы с увеличением в 90-100 раз и окуляры, увеличивающие изображение в 7-10 раз.Объективы подразделяются на сухие и иммерсионные. При работе с сухими объективами между фронтальной линзой и изучаемым объектом находится воздух. При этом, в виду разницы коэффициентов преломления предметного стекла и воздуха, часть световых лучей отклоняется и не попадает в объектив. Объективы иммерсионные обозначают буквами О.И. и цифрами х90 и х100. Современные микроскопы имеют ряд усовершенствований. Так, бинокулярный микроскоп с двумя тубусами дает возможность вести наблюдение одновременно обоими глазами. Для изучения неокрашенных объектов используется фазово-контрастное устройство, с помощью которого можно получить четкое контрастное изображение прозрачных, не имеющих окраски микроорганизмов. При прохождении света через окрашенный препарат, изменяется интенсивность света (амплитуда световой волны), что легко улавливается глазом. При прохождении же пучка света через неокрашенный, прозрачный объект изменяется только скорость его движения, т.е. фаза колебаний светового луча, что глазом не улавливается. Принцип фазово-контрастного устройства заключается в переводе невидимых колебаний света в амплитудные видимые. Рис 1. Устройство микроскопа:1 – окуляр, 2 – тубус, 3 – штатив, 4 – револьвер объективов,5 – предметный столик,6 – конденсор, 7 – микровинт, 8 – макровинт9 – зеркало, 10 – основаниеIII ЭТАП ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫТехника микроскопированияПРАВИЛА РАБОТЫ С СУХИМИ ОБЪЕКТИВАМИ

Приготовленный препарат помещают на предметный столик и закрепляют зажимами. С помощью сухого объектива с увеличением x7 просматривают несколько полей зрения.

Передвигают предметный столик боковыми винтами.

Нужный для исследования участок препарата устанавливают в центре поля зрения.

Поднимают тубус и вращением револьвера переводят объектив с увеличением x40, наблюдая сбоку, макрометрическим винтом снова опускают тубус с объективом почти до соприкосновения с препаратом.

Смотрят в окуляр, очень медленно поднимают тубус до появления контуров изображения.

Точную фокусировку производят с помощью микрометрического винта, вращая его в ту или другую сторону, но не более чем на один полный оборот.

Если при вращении микрометрического винта чувствуется сопротивление, значит, ход его пройден до конца. В этом случае поворачивают винт на один-два полных оборота в обратную сторону, снова находят изображение при помощи макрометрического винта и переходят к работе с микрометрическим винтом.

Полезно приучить себя при микроскопировании держать оба глаза открытыми и пользоваться ими попеременно, так как при этом меньше утомляется зрение.

ПРАВИЛА ИММЕРСИОННОЙ МИКРОСКОПИИ

Микроскоп устанавливают в рабочее положение – увеличение объективов

Устанавливают освещение, включая лампу или направляя свет на зеркало микроскопа. Конденсор должен быть поднят до упора, диафрагма открыта (рис. №3). На препарат наносят каплю иммерсионного масла.

Препарат помещают на предметный столик и фиксируют его клеммами

Наблюдая сбоку, опускают тубус с объективом 90х, 100х макровинтами в масло почти до соприкосновения с препаратом. Затем, глядя в окуляр (7х, 10х), макровинтом очень медленно поднимают объектив до появления изображения и с помощью микровинта производят окончательную фокусировку четкого изображения.

При микроскопии определяют взаимное расположение микроорганизмов, их размеры, форму, структуру, окраску

После просмотра препарата револьвер переводят на малое увеличение 8х и только после этого препарат снимают со столика.

Фронтальную линзу объектива протирают марлей, смоченной чистым бензином или эфиром для удаления остатков иммерсионного масла

Затем опускают предметный столик (или конденсор в микроскопах с неподвижным столиком) сдают микроскопы преподавателю.

Рис. № 3. Рабочие положения микроскоповIV ЭТАП ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫМИКРОСКОПИРОВАНИЕ ГОТОВЫХ ПРЕПАРАТОВ

Промикроскопировать готовые микробиологические препараты.

Зарисовать в тетради для лабораторных работ просмотренные препараты.

Сделать вывод (описать увиденные бактерии – определить их морфологию).

V ЭТАП ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫПо окончанию микроскопирования

студент должен привести в порядок свое рабочее место;

сдать микроскоп и готовые микроскопические препараты лаборанту;

представить преподавателю на проверку тетрадь для лабораторных работ.

МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯДЛЯ СТУДЕНТОВ К ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЕ № 2Тема «Простые и сложные методы окрашивания. Окраска препаратов по методу Грама »Цель: освоить методику приготовления микропрепарата и окраску его простым методом и по методу Грама.Студент должен знать:

этапы приготовления препарата, его фиксацию

простые методы окрашивания

сложные методы, сущность метода Грама

особенности окраски по методу Граму, красители и реактивы

Студент должен уметь:

приготовить бактериальный препарат

произвести окраску препарата по методу Грама

микроскопировать окрашенные препараты с использованием иммерсионной системы

Общие и профессиональные компетенции, которые актуализируются во время проведении лабораторной работы при изучении учебной дисциплины Основы микробиологии и иммунологии:ОК 1. Понимать сущность и социальную значимость своей будущей профессии, проявлять к ней устойчивый интерес.ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы выполнения профессиональных задач, оценивать их выполнение и качество.ОК 6. Работать в коллективе и команде, эффективно общаться с коллегами, руководством потребителями.ОК 7. Брать на себя ответственность за работу членов команды (подчиненных), за результат выполнения заданий.ОК 12. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда, производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.ПК 1.5. Проводить первичный туалет новорожденного, оценивать и контролировать динамику его состояния, осуществлять уход и обучать родителей уходу за новорожденным. ПК 2.3. Оказывать доврачебную помощь при острых заболеваниях, несчастных случаях, чрезвычайных ситуациях и в условиях эпидемии. ПК 3.1. Проводить профилактические осмотры и диспансеризацию женщин в различные периоды жизни. ПК 3.3. Выполнять диагностические манипуляции самостоятельно в пределах своих полномочий. ПК 3.6. Проводить санитарно-просветительскую работу по вопросам планирования семьи, сохранения и укрепления репродуктивного здоровья.ПК 4.2. Оказывать профилактическую и медико-социальную помощь беременной, роженице, родильнице при акушерской и экстрагенитальной патологии. Оснащение лабораторной работы: 1. Приборы для микроскопии - микроскопы.2. Иммерсионное масло.3. Предметные стекла, бактериальная петля, спиртовка, чашки Петри, пробирки с питательной средой.4. Набор красок по Граму.План самостоятельной лабораторной работы:

Получить микроскопы и необходимое оснащение для окраски препарата; зафиксировать в тетради тему, цель, требования к знаниям и умениям, оснащение лабораторной работы.

Ознакомиться с простыми и сложными методами окрашивания, окраской препаратов по методу Грама. Основные положения законспектировать в тетрадь.

Подготовить препараты и окрасить их простым методом и по методу Грама. Препараты промикроскопировать с иммерсией. Зарисовать результаты микроскопирования в тетрадь. Сделать вывод.

I ЭТАП ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫПодготовительный Оснащение лабораторной работы: 1. Приборы для микроскопии - микроскопы.2. Иммерсионное масло.3. Предметные стекла, бактериальная петля, спиртовка, чашки Петри, пробирки с питательной средой.4. Набор красок по Граму.II ЭТАП ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫПриготовление микропрепарата и его окраскаЭТАПЫ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ПРЕПАРАТА:

Приготовление мазка

Высушивание

Фиксация

Окрашивание

АЛГОРИТМ ПРИГОТОВЛЕНИЯ МАЗКА:(из культуры, выращенной на скошенном агаре)

Предметное стекло аккуратно берут за ребро и с обратной стороны нанесения мазка наносят его границы и номер культуры

Зажигают спиртовку, горелку, предварительно выпустив пары спирта.

Фламбируют поверхность стекла, где будет располагаться мазок.

Стекло помещают вблизи спиртовки на чашку Петри.

В левую руку берут пробирку со стерильным физическим раствором (дистиллированной водой) и помещают между 1 и 2 пальцами таким образом, что ладонь находится под пробиркой и горлышко пробирки направлено в зону спиртовки.

В правую берут бактериальную петлю, как карандаш

Петлю фламбируют до покраснения сначала горизонтально, затем вертикально (рис. №1)

Не выпуская петли, мизинцем правой руки прижимают пробку физ.раствора к ладони и осторожно вынимают е из пробирки. Движения должны быть плавными.

Горло пробирки обжигают в пламени и вводят петлю.

Берут выпускной петлей физ. растворр и выносят на стекло пару капель в границы мазка.

Закрывают пробку, предварительно проведя через пламя спиртовки пробку и горло пробирки одновременно

Ставят пробирку в штатив.

В левую руку берут пробирку с культурой и помещают, как и пробирку с физ. раствором (см. пункт №5), петля в правой руке

Петлю фламбируют.

Над пламенем спиртовки спокойно вынимают пробку с культуры (см. пункт №8), одновременно обжигая пробку и горло пробирки

Вводят в пробирку петлю, охлаждая ее о стенки пробирки

Осторожно закрывают и захватывают петлей культуру, не повреждая агара, и вынимают петлю, не касаясь ею стенок пробирки

Петлю с культурой вносят в каплю физ. раствора и осторожно эмульгируют, незаходя за границы мазка.

Бактериальную петлю с остатками культуры прожигают до покраснения в пламени спиртовки.

Прожигают горло пробирки пробку в пламени, одновременно. Закрывают пробирку.

Пробирку с культурой и петлю ставят в штатив

Приготовленный мазок высушивают либо на воздухе либо высоко над пламенем спиртовки.

Примечание:

Приготовление мазка из культуры, выращенной на жидкой питательной среде, не требует использования физ. раствора. Мазок готовят согласно пунктам № 13 -№ 22

При приготовлении мазка из культуры, выросшей на чашке Петри необходимо:

отметить изолированную колонию со стороны дна чашки

чашку берут в левую руку и в сторону спиртовки приоткрывают крышку, придерживая ее первым и вторым пальцами левой руки

прокаленную петлю вводят под крышку чашки, остужая ее о крышку

осторожно откалывают часть выделенной колонии и, не задевая края чашки, выносят на стекло с физ. раствором

дальнейшие манипуляции согласно пунктам №18, 19, 21, 22

При подсушивании мазка следует помнить: высокая температура может нарушить структуру клетки

Рис. 1Схема приготовления мазкаВиды фиксации

Физический – в пламени спиртовки

Химический – в растворах спирта, ацетона, смеси Никифорова (1:1 спирт и эфир)

Цели фиксации

Обеззараживание патогенных микробов

Закрепление клеток на стекле

Убитые микроорганизмы лучше воспринимают красители

СПОСОБ ГРАМА

На фиксированный мазок нанести генцианвиолет (бумага по Синеву) на 1-2 мин

Краску слить и нанести раствор Люголя на 1 мин

Раствор Люголя слить и на мазок нанести 96% спирт на 15-20 сек в зависимости от толщины мазка

Спирт смыть дистиллированной водой

Мазок дополнительно окрасить разведенным фуксином Пфейффера на 2-3 мин

Краситель смыть водой, препарат высушить, промикроскопировать.

Микроскопия с иммерсией.

Генцианвиолет связывается с пептидогликаном клеточной стенки (рис. №2). Толстый слой пептидогликана грамположительных бактерий связывает много красителя, тонкий слой – грамотрицательных – мало.Раствор Люголя фиксирует краситель за счет образования комплекса – краситель-пептидогликан-йод. При обработке мазка спиртом грамотрицательные микроорганизмы быстро теряют краситель и обесцвечиваются, а грамположительные остаются окрашенными в синий цвет. Дополнительный краситель окрашивает грамотрицательные микроорганизмы в красный цветРис. 2Грамположительные микроорганизмыIII ЭТАП ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫМИКРОСКОПИРОВАНИЕ ПРИГОТОВЛЕННЫХ ПРЕПАРАТОВ

Промикроскопировать приготовленные микробиологические препараты.

Зарисовать в тетради для лабораторных работ просмотренные препараты.

Сделать вывод (описать увиденные бактерии – определить их морфологические и тинкториальные свойства).

Грамположительные (Гр+) бактерии окрашиваются в сине-фиолетовый цвет. Грамотрицательные (Гр-) бактерии окрашиваются в красный цвет.СтрептококкиГр+кокки, располагающиеся в виде цепочекStreptococcus piogenesEnterococcus faecalisСтафилококки Гр+кокки, располагающиеся ввиде скоплений,напоминающихвиноградную гроздьStaphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Бактерии Гр-палочковидные неспорообразующиие микроорганизмыEsherichia coliSalmonella typhiMycobacterium tuberculosis Клостридии Гр+палочковидные спорообразующие микроорганизмы. Диаметр спор больше поперечника клеткиClostridium perfringensClostridium tetaniClostridium botulinumВибрионы Гр-Vibrio choleraeVibrio parahaemolyticusV ЭТАП ЛАБОРАТОРНОЙ РАБОТЫЗАКЛЮЧИТЕЛЬНЫЙПо окончанию микроскопирования

студент должен привести в порядок свое рабочее место;

сдать микроскоп, все оснащение для подготовки препарата и его окраски лаборанту;

представить преподавателю на проверку тетрадь для лабораторных работ.